با سلام

 دوستان خوبم ، دو كنگره خوب دیگر هم امسال برگزار می شود كه مرتبط با رشته بچه های میكروب شناسی است و هنوز هم مهلت ثبت نام دارند : 

- بیست و چهارمین همایش بین المللی بیماریهای کودکان مانند سال های گذشته در تاریخ 20 تا 24 مهرماه 1391 در تهران- آمفی تئاتر مرکز طبی کودکان برگزار خواهد شد.

 سایت همایش : http://www.iranped.ir  

- ششمین کنگره ویروس شناسی ایران (پاسداشت مقام علمی دکتر احمد فیاض) در تاریخ 26 تا 28 مهرماه 1391 در دانشگاه تربیت مدرس تهران برگزار خواهد شد. دریافت خلاصه مقالات جهت ارائه در ششمین کنگره ویروس شناسی ایران از تاریخ 15 اردیبهشت تا 31 خرداد 1391 از طریق سایت همایش امکان پذیر می باشد. جهت کسب اطلاعات بیشتر می توانید با شماره تماس 88020916-021 حاصل فرمایید.

سایت همایش : http://www.cisv.ir

موفق باشید.

تلفن

خانم زرین   : 09177917995

استخراج DNA با استفاده از روش فنول کلروفرم بهترین روش استخراج DNA

مواد مورد استفاده:
فنول ، کلروفرم، EDTA)Lysis،Tris،D.W،(SDS،آمونیوم استات،اتانول 100,70%، Protenas K، Solvent
لوله فالکون حاوی فنول باید درون دمای یخچال و به صورت ایستاده قرار گرفته باشد(چون حاوی دو فاز می باشد و نباید دو فاز با هم مخلوط شوند.فاز زیرین حاوی ترکیب فنول و فاز رویی حاوی Tris جهت جلوگیری از اکسیده شدن محلول فنول می باشد).از قبل محلولی جهت لایز کردن دیواره سلولی آماده کردیم(از ترکیبی از موادTris 10mµ 0.1211gr , EDTA 0.1µ 3.722 gr , SDS 0.5% با D.Wبه حجم 100ml رساندیم.جهت اینکه این مواد خوب در محلول حل شوند مقداری ورتکس کردیم و به مدت 15minدر دمای 50 درجه سانتی گراد دستگاه فور گذاشتیم).مراحل انجام کار چه افزودن و چه برداشتن محلول در این روش زیر هود انجام می گیرد.

100µlاز Buffy coatکه قبلا آماده کردیم را درون میکروتیوپ 2ml می ریزیم، بعد 400µl از محلول lysis که قبلا آماده کردیم را به آن اضافه و 3تا 6 ثانیه ورتکس تا خوب در هم حل شوند بعد 10 ثانیه میکروفیوژ میکنیم تا محلولی که به دواره و در میکروتیوپ چسبیده به قسمت پایین میکروتیوب بیاید،در مرحله بعد به مدت یک ساعت میکرو تیوب ها را در دمای 25 درجه سانتی گراد Dry-block قرار میدهیم تا محلول حاوی لایزز بتواند دیواره سلولی را باز کرده و محتویات سلولی را در دسترس قرار دهد.بعد از زمان مورد نظر به هر میکروتیوب 2 µlاز  Protenas K اضافه،3 تا 4 ثانیه ورتکس و بعد 10 ثانیه میکروفیوژ و بعد به مدت 3ساعت میکرو تیوب ها را در دمای 25 درجه سانتی گراد Dry-block قرار میدهیم تا Protenas K درون محلول بتواند DNAدرون هسته را جدا می کند.داخل یک بشر 50ml محلول ویست 10%جهت غیر فعال کردن مواد و محلول های اضافی درست میکنیم(شامل 10mlاز محلول وایتکس و90mlآب)در مرحله بعد چون مواد و ناخالصی های درون محلول(شامل دیواره های سلولی) زیاد شده هم حجم محلول درون میکروتیوب از محلول فنول اضافه و 10 ثانیه ورتکس انجام می دهیم و بعد هم حجم فنول به محلول کلرو فرم(باید در دمای یخچال نگهداری شود) اضافه می نماییم و مجددا 10 ثانیه ورتکس میکنیم و بعد 15min با دور 14000rpm در دمای 4 درجه سانتی گراد سانترفیوژ(یخچال دار) می نماییم.در این مرحله فنول باعث جدا سازی هیستون ها و پروتئین ها از DNAشده و آن را خالص و عاری از هر ناخالصی می کند،نباید زیاد فنول را درون محلول نگه داشت زیرا باعث میشود که به خود DNA هم آسیب برسد،کلروفرم هم باعث می شود که فاز آلی و آبی از هم جدا شوند، فاز آلی که در پایین میکروتیوب قرار می گیرد شامل فنول ،کلروفرم، و مواد اضافی و جدا شده از DNA(دیواره سلولی و پروتئین ها) می باشد. فاز رویی هم شامل آب و DNA می باشد،بعضی از میکروتیوب ها هم یک رینگ بین فاز آلی و فاز آبی تشکیل می دهند شامل پروتئین جدا شده از DNA می باشد که این رینگ به رنگ شیری کدر از دو فاز قابل تمایز می باشد.

باید به آرامی میکروتیوب ها را از درون دستگاه سانترفیوژ خارج کرد که فاز ها با هم مخلوط نشوند،بعد زیر هود فاز رویی را درون یک میکروتیوب دیگر میریزیم (به هیچ عنوان نباید رینگ حاوی پروتئین بین دو فاز به فاز آبی به میکروتیوب جدید منتقل شود زیرا در مرحله آخر مشاهده باند اسمیر فراوان مانع دیدن باند می گردد).فاز زیری(فاز آلی)را درون ظرف ویست که از قبل آماده کردیم میریزیم تا اگر DNA یا مواد دیگر در آن باشد غیر فعال شوند. در صورتی که محلول آبی که جدا کردیم کدر باشد یک بار دیگر مرحله قبل را تکرار(یعنی هم حجم این محلولی که داریم کلروفرم اضافه میکنیم تا ضایعاتی که درون محلول مانده جدا کند و مجددا فاز رویی را درون یک میکروتیوب دیگر می ریزیم.در این مرحله دیگر نیازی به افزودن فنول نیست،فقط کلروفرم اضافه و مراحل را انجام می دهیم).

در مرحله آخر جدا کردن فاز آبی میزان دقیق فاز آبی را با کشیدن با سمپلراندازه میگیریم،بعد به اندازه 0.2 درون هر میکروتیوب که جدا کردیم استات آمونیوم 10 µ اضافه و دو برابر حجم اتانول 100% اضافه میکنیم .در این مرحه وقتی حلال آب باشه چون قدرت یونی نسبتا بالایی داره مولکول های اسیدنوکلئیک (گروه های فسفات باردار) با آب واکنش میدن و خوب در آب حل می شوند (به همین جهت با محلول های آلی میشود اسید نوکلئیک را از بقیه ی اجزای سلولی جدا کرد). وقتی اتانول به محلول اضافه میشود قدرت یونی حلال کم و تمایل اسید نوکلئیک هم به حلال کم و با یون های موجود در محیط(در اینجا استات آمونیوم) واکنش و سنگین میشود و رسوب می کند. نباید در این مرحله با دستگاه ورتکس محلول را بهم زد زیرا رشته های DNA شکل گرفته و در صورت ورتکس آنها تیکه تیکه می شوند و برای همین باید به آرامی بین انگشتان دست به مدت 10 دقیقه میکروتیوب ها را تکان داد تا خوب محلول حل شود در این مرحله میتوان بار اول تکان دادن میکروتیوب ، با چشم غیر مسلح رشته های DNA که با ترکیب آمونیوم استات ضخیم شده اند را مشاهده نمود.بعد میکروتیوب ها را جهت آبگیری هر چه بهتر اتانول به مدت حداقل یک ساعت درون فریزر با دمای -20 قرار داد که ما در این مطالعه به مدت 16 ساعت این مرحله را انجام می دادیم  در صورتی که خوب اتانول با محلول حل نشده باشد محلول دچار یخ زدگی میشود زیرا اتانول عمل آبگیری را انجام می دهد.بعد از این مرحله میکرو تیوب ها نباید دچار یخ زدگی شده باشند،در صورت یخ زدگی باید منتظر ماند تا در دمای محیط یخ آنها باز شود و بعد در دستگاه سانتر فیوژ با دور 14000rpm و زمان 15min و دمای 4درجه سانتی گراد سانترفیوژ را جهت رسوب DNAانجام می دهیم،در این مرحله مثل مراحل قبل یک ظرف حاوی محلول ویست آماده می نماییم،بعد از اتمام سانترفیوژ محلول را به صورت یکدفعه درون ظرف ویست خالی میکنیم و آن را بر میگردانیم در مرحله بعد به هر میکروتیوب حاوی رسوب DNA به اندازه مجموع حجم Buffy Coat اولیه و مححلول لیزیز که جمعا 500mlشده بود الکل 70% اضافه میکنیم و به آرامی 3تا 6 ثانیه ورتکس میکنیم تا رسوب DNAدرون الکل حل شود .سپس با دور 14000rpm، دمای 4درجه سانتی گراد،10min سانترفیوژ می کنیم.بعد از سانترفیوژ محلول را دروز ضرف ویست خالی میکنیم و روی گاز استریل میکروتیوب ها را برمیگردانیم تا قطرات الکل باقی مانده خالی شود بعد میکرو تیوب ها را در دمای 37 درجه سانتی گراد     Dry-block قرار میدهیم تا قطرات الکل از میکرو تیوب بخار شوند،جهت فهمیدن اینکه الکل کامل از میکروتیوب کامل بخار شده یا نه میکروتیوب رو روبروی چشممان میگیریم و و با انگشت به آرامی به ته میکرو تیوب ضربه میزنیم که اگه قطرات ریزی مانده باشده مشخص می شود.بعد از تبخیر کامل الکل از میکرو تیوب ها به ازای 100mlاز Buffy Coat اولیه به هر میکروتیوب 20 µl از محلول Solvent کیت DNP^TM  اضافه و بعد میکروتیوب ها را به آرامی 3تا 6 ثانیه جهت حل شدن DNAدرون Solvent به آرامی ورتکس می کنیم بعد 2 دقیقه میکروتیوب ها را در دمای 37 درون Dry-block جهت بهتر حل شدن DNA قرار می دهیم و سپس میروتیوب های حاوی محلول DNAرا به درون فریزر با دمای -20 درجه سانتی گراد جهت انجام PCR قرار می دهیم. حداقل باید یک ساعت نمونه جدا شده DNAدرون فریزر بماند و بعد PCR انجام شود.

 گردآورنده: احمد نیکنام

جهت هر گونه سوال در مورد این روش با این ایمیل در تماس باشید

AHMADNIKNAM@HOTMAIL.COM

با سلام

دکتر هرمان ابینگهاوس در سال 1885 تحقیقی در مورد روند فراموشی نسبت به زمان انجام داد که شایان توجه بود. به گزارش برترین ها وی فهرستی شامل 13 کلمه بی معنی را به صورت کامل حفظ کرد و بعد از فواصل زمانی مختلف (از 20 دقیقه  تا 31 دقیقه) خود را می آزمود تا بداند در هر فاصله زمانی چه تعداد از واژه ها را به خاطر سپرده است. نتایج وی به قرار زیر بود:
پس از 20 دقیقه 60 درصد مطالب را حفظ بود، پس از یک ساعت کمتر از 50 درصد، پس از 8 ساعت کمتر از 40 درصد، پس از 24 ساعت نزدیک 30 درصد، پس از پنج روز کمتر از 30 درصد و بالاخره پس از 31 روز نزدیک 20 درصد مطالب در حافظه او باقی مانده بود. به عبارت دیگر این آزمایش به سادگی نشان داد 40 درصد مطالب در 20 دقیقه نخست و 70 درصد طی 48 ساعت نخست اگر مرور صحیح صورت نگیرد فراموش می شوند.
زمان مرور
باتوجه به اینکه طبق یافته های ابینگهاوس بیشترین میزان فراموشی (70 درصد) در 24 تا 48 ساعت نخست اتفاق می افتد پس مهم ترین زمان های مرور همان 48 ساعت اولیه است. به گزارش برترین ها مرور بلافاصله مطالب خوانده شده، تاثیر بسزایی در تثبیت مطالب و جلوگیری از فراموشی آنها دارد. 10 تا 20 دقیقه از زمانی را که برای مطالب هر درس درنظر گرفته اید را صرف مرور مطالب خوانده شده در همان جلسه کنید، تعجب خواهید کرد از اینکه مقداری از مطالب را در همان دقایق اولیه فراموش کرده اید.
یادداشت و نت برداری
برای اینکه بتوانید همیشه و در کلیه امتحانات نمره الف بگیرید یادداشت برداری موثر و صحیح یک عامل ضروری و اساسی است.
چراکه با خلاصه برداری دفعات مرور شما بیشتر می شود و فراموشی به حداقل می رسد، قسمت اعظم درس خواندن شما باید از روی یادداشت برداری های شما باشد.
20 نکته در یادداشت برداری
1 – ابتدا حجمی را که می خواهید خلاصه برداری کنید مشخص کنید.
2 – با تورق سریع از اصل موضوع اطلاعات کسب کنید به شکل ها، تیترها و عناوین کتاب دقت کنید.
3 – یادداشت ها را براساس اشخاص، فرمول ها، اصطلاحات، تعاریف و... دسته بندی کنید.
4 – از درخت حافظه استفاده کنید که از نظر سازماندهی ذهن و تاثیر در یادگیری از کارآیی فوق العاده ای برخوردار است. برای این کار باید عنوان فصل را به عنوان ریشه درخت در داخل یک دایره، مربع یا هر شکل هندسی مطلوب در سمت راست قرار دهید و سپس نکات اصلی و فرعی را روی شاخه های اصلی و فرعی در سمت چپ بنویسید. در این تکنیک از هر دو نیم کره مغز استفاده می شود.
5 – مطالب را رونویسی نکنید به زبان خودتان بنویسید.
6 – اصل نظم و زیبایی را در خلاصه برداری رعایت کنید.
7 – مطالب باید کوتاه باشند اما مفهوم را برسانند ترجیحا فعل داشته باشند.
8 – سعی کنید یادداشت هایتان در حدی مطمئن باشد که جایگزین مناسبی برای منابع اصلی باشد.
9 – خلاقیت در یادداشت برداری را فراموش نکنید. چه به لحاظ نحوه نگارش و چه به لحاظ شکل نوشتار و نمودارهایی که به کار می برید.
10 – کدگذاری کنید: مثلا در درس فارسی برای به خاطر سپردن آثار نظامی (ملخ ها): م (مخزن الاسرار)، ل (لیلی و مجنون) خ (خسرو و شیرین)، ه (هفت پیکر) و الف (اسکندرنامه)
11 – از علامت های اختصاری استفاده کنید.
12 – میزان اهمیت مطالب را با علائم هندسین نشان دهید.
13 – مقابل هر شاخه فرعی از مثال ها  استفاده کنید.
14 – نمودارها و تحلیل آن را به صورت جامع بنویسید.
15 – در صورت نیاز از شکل های آن مطلب کمک بگیرید.
16 – بالای هر خلاصه برداری آدرس کامل آن را که شامل عنوان فصل، صفحه و نام کتاب است بنویسید.
17 – یادداشت ها باید به گونه ای باشد که قابل حمل باشد. بنابراین استفاده از سررسید یا سالنامه را پیشنهاد نمی کنیم.
18 – بهترین راه خلاصه برداری آن است که آنها را روی اوراقی جداگانه و به هم پیوسته بنویسید تا اگر نیازی به چک کردن و اصلاح آن بود بتوانیم با بازنویسی آن دوباره مجموعه ای قابل قبول داشته باشیم.
19 – در پایان خلاصه برداری سعی کنید درخت حافظه خود را یک بار مرحله به مرحله مرور و به خاطر آورید.
20 – در هر فرصتی خلاصه هایتان را مرتب مرور کنید.

موفق باشید./